期刊信息
主办:沈阳药科大学;中国药学会
主管:辽宁省教育厅
ISSN:1005-0108
CN:21-1313/R
语言:中文
周期:月刊
影响因子:0.190283
数据库收录:
文摘杂志;北大核心期刊(2017版);化学文摘(网络版);中国科学引文数据库(2011-2012);中国科学引文数据库(2013-2014);中国科学引文数据库(2015-2016);中国科学引文数据库(2017-2018);中国科学引文数据库(2019-2020);日本科学技术振兴机构数据库;中国科技核心期刊;期刊分类:药学
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研究论文
几种药物抗弓形虫活性的检测(2)
【作者】网站采编
【关键词】
【摘要】1.7药物对弓形虫的半数抑制浓度(IC50)的检测 将HFF细胞接种96孔培养板,当细胞铺满孔底时,接种弓形虫RH-GFP 速殖子200 个/孔,同时加入不同浓度和不同种类
1.7药物对弓形虫的半数抑制浓度(IC50)的检测 将HFF细胞接种96孔培养板,当细胞铺满孔底时,接种弓形虫RH-GFP 速殖子200 个/孔,同时加入不同浓度和不同种类的药物(见表3和4),每天观察虫体的生长情况和细胞状态,及时更换新的含药物的培养基。96 h 后用 27G针破碎细胞充分释放虫体,并用流式细胞仪计数每孔虫体的数目。每孔重复 3次,每个试验重复3次。药物对虫体的抑制率(%) =(未加药组虫体总数-加药组虫体总数)/未加药组虫体总数×100%。统计不同药物的半数抑制浓度。
1.8药物作用特点的初步研究 当HFF细胞铺满96 孔培养板孔底时,加入含不同药物的培养基,姜黄素终浓度为4 μg/mL、阿特拉津为150 μg/mL、妥曲珠利为 50 μg/mL、泊那珠利为50 μg/mL、对照药物蒿甲醚为50 μg/mL,37 ℃、5% CO2条件下培养 2 h或24 h,用 PBS 洗掉孔内药物残留;再分别接种RH-GFP速殖子 5×103个/孔,培养 2 h 后, PBS 洗去未粘附的虫体后继续培养。24 h 后在荧光显微镜下计数平均每个视野内带虫空泡的数目及每个带虫空泡内虫体的数量。
将纯化的RH-GFP速殖子悬浮于含有不同种类药物培养基中,姜黄素终浓度为 2 μg/mL、阿特拉津为150 μg/mL、妥曲珠利为50 μg/mL、泊那珠利为50 μg/mL、对照药物蒿甲醚为50 μg/mL;作用 20 min 后,将虫体悬液加入已被 HFF 细胞铺满的 96孔培养板中,每孔含有5×103个速殖子;37 ℃、5% CO2条件下培养 2 h, PBS洗掉未粘附或未入侵的虫体,继续培养。48 h 后荧光显微镜下观察和计数虫体的入侵和增殖情况。
1.9药物体内抗弓形虫效果检测 将30只5周龄的BALB/c小鼠分成6组,每组5只,其中1~5组通过腹腔注射的方式感染弓形虫RH株速殖子100个/只小鼠,2 h后通过腹腔注射方式用不同剂量的姜黄素[0、50 mg/(kg·d)、100 mg/(kg·d)、150 mg/(kg·d)]进行治疗,磺胺嘧啶和乙胺嘧啶联合口服用药组(200 mg+20 mg) /(kg·d)为对照组,第6组不感染弓形虫仅腹腔注射姜黄素[150 mg/(kg·d)],检测其对小鼠的毒性,连续用药6 d。每天观察小鼠发病情况并记录小鼠的存活率。
2 结 果
2.1药物对HFF细胞的毒性作用 姜黄素对HFF细胞最大安全浓度是4 μg/mL,妥曲珠利、泊那珠利、阿特拉津、环磷酰胺、吡喹酮和草甘膦分别为80 μg/mL、100 μg/mL、150 μg/mL、50 μg/mL、100 μg/mL、50 μg/mL,对照药物蒿甲醚对细胞无明显毒性作用,在浓度为1000 μg/mL 时,细胞仍然生长良好(见表1、表2)。
表1 姜黄素对HFF细胞毒性Tab.1 Cytotoxicity of curcumin to HFF cells姜黄素浓度/(μg/mL)细胞存活率/%
表2 不同药物对HFF细胞毒性Tab.2 Cytotoxicity of differernt drugs to HFF cells药物浓度/(μg/mL)细胞存活率/%妥曲珠利泊那珠利阿特拉津蒿甲醚环磷酰胺吡喹酮草甘膦.3198..7596....6496...2893....2691...-.
2.2药物对弓形虫增殖的影响 与对照组相比,姜黄素、妥曲珠利、泊那珠利分别在4 μg/mL、60 μg/mL、60 μg/mL时均对弓形虫增殖有很好的抑制作用(P<0.05)。草甘膦、吡喹酮、三氮脒和环磷酰胺无效(见图1A)。弓形虫增殖对药物浓度依赖性的结果显示,随着药物浓度的增加,弓形虫的增殖也逐渐被抑制(图1B)。
注:A图为弓形虫增殖试验,①代表与DMSO组(对照组)比较,差异有统计学意义(P<0.05);B图为药物对弓形虫增殖的剂量效应曲线。图1 药物对弓形虫增殖的影响Fig.1 Effects of drugs on the proliferation
2.3药物对弓形虫入侵的影响 入侵试验结果见图2A,只有姜黄素(4 μg/mL)能够显著抑制弓形虫的入侵,钙离子螯合剂BAPTA-AM为对照;随着姜黄素浓度的增加,弓形虫的入侵量逐渐减少(图2B)。
A图为弓形虫入侵试验,①代表与DMSO组(对照组)比较,差异有统计学意义(P<0.05);B图为药物对弓形虫入侵的剂量效应曲线。图2 药物对弓形虫入侵的影响Fig.2 Effects of drugs on the invision
2.4不同药物对弓形虫生长的抑制作用 流式细胞仪计数结果显示,姜黄素在体外对弓形虫的生长有很好的抑制作用,浓度为1 μg/mL时,对弓形虫的抑制率达(67.)% (见表3);妥曲珠利和泊那珠利在50 μg/mL时对弓形虫生长的抑制率分别是(88.)%和(64.)%;阿特拉津在100 μg/mL 时对弓形虫生长的抑制率仅为 (68.)%;蒿甲醚对弓形虫也有很好的抑制作用,1 μg/mL 时对弓形虫的抑制率达(51.)%(见表4)。姜黄素、妥曲珠利、泊那珠利、阿特拉津和蒿甲醚对弓形虫的半数抑制浓度分别是(0.)μg/mL、(14.)μg/mL、(16.)μg/mL、(59.)μg/mL、(0.)μg/mL。
表3 不同浓度姜黄素对弓形虫生长的抑制率Tab.3 Inhibition rate of different concentrations of drugs 姜黄素浓度/(μg/mL)对弓形虫的抑制率/%67.
文章来源:《中国药物化学杂志》 网址: http://www.zgywhxzz.cn/qikandaodu/2021/0622/589.html
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